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ELISA試劑盒的參閱規(guī)范你有必要知道的事，你知道多少呢？下面是我公司技術(shù)人員對(duì)這些問(wèn)題解決狀況的一些辦法和見(jiàn)地，期待我們拍磚指正。
*、規(guī)范曲線
1.定量辦法：規(guī)范曲線zui少由5個(gè)濃度組成，測(cè)定次數(shù)不少于5次，以斷定作業(yè)濃度規(guī)模和IC50規(guī)模。
2.定性辦法：作業(yè)濃度規(guī)模經(jīng)過(guò)陰性、臨界值濃度和陽(yáng)性的樣品測(cè)定來(lái)斷定，每個(gè)濃度重復(fù)不少于5次，濃度與響應(yīng)值之間應(yīng)有必定的。
第二、檢查限和定量限
1.檢查限：20份空白樣品測(cè)定均值加3倍規(guī)范差。
2.定量限：應(yīng)大于規(guī)范曲線中zui低濃度點(diǎn)。關(guān)于定量辦法，應(yīng)對(duì)該濃度樣品zui少測(cè)定6次進(jìn)行驗(yàn)證，而不能經(jīng)過(guò)外延法揣度。
第三、臨界值（cut-off值）的斷定
關(guān)于有zui高殘留定量的藥物，檢查辦法的臨界值為20份增加MRL濃度的樣品重復(fù)3次測(cè)定的均值減去1.64倍規(guī)范差，即95%置信限處。
關(guān)于禁用藥物，檢查辦法的臨界值為定量限，該值應(yīng)到達(dá)*的目標(biāo)。
第四、ELISA試劑盒精密度和準(zhǔn)確度
關(guān)于有zui高殘留定量的藥物，增加濃度為MRL及MRL上下各一個(gè)濃度；關(guān)于禁用藥物，增加濃度為定量限和2倍定量限，每個(gè)增加濃度zui少測(cè)定5個(gè)平行樣，并zui少進(jìn)行3批實(shí)驗(yàn)（不一樣檢查日期，不一樣規(guī)范曲線，不一樣批次試劑盒）。
1.準(zhǔn)確度：回收率規(guī)模大于40%或契合相應(yīng)檢查規(guī)范的要求。
2.精密度：以變異系數(shù)表明。
批內(nèi)變異系數(shù)：每批平行樣之間的變異系數(shù)小于或等于25%，關(guān)于禁用藥物小于或等于30%.
批間變異系數(shù)：一切樣品之間的變異系數(shù)值小于或等于30%，elisa試劑盒關(guān)于禁用藥物小于或等于40%.
定性辦法：陰性和陽(yáng)性樣品各測(cè)定不少于50份，斷定假陽(yáng)性率和假陰性率。
第五、穿插反應(yīng)
試劑盒與待檢藥物類似物、代謝物或一起存在的藥物測(cè)定穿插反應(yīng)率。
第六、保留期
保留期經(jīng)過(guò)保留條件的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果斷定。
第七、復(fù)核實(shí)驗(yàn)
1.定量辦法：檢查限、IC50以及zui少兩個(gè)增加濃度的準(zhǔn)確度和精密度，并與理化辦法（或與具代表性進(jìn)口試劑盒）對(duì)比。
2.定性辦法：檢查限、假陽(yáng)性率和假陰性率。
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